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實(shí)時(shí)定量PCR法對(duì)mRNA的檢測(cè)、分析及定量的方法

2022.11.27

方法:實(shí)時(shí)定量PCR

目標(biāo)RNA的類型:mRNA

同時(shí)定量的目標(biāo)RNA的數(shù)量:通常為一個(gè),但也可檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)RNA,參見Stanley和Szewczuk(2005)等的研究結(jié)果,他們?cè)趩蝹€(gè)多重反應(yīng)中同時(shí)分析過(guò)72個(gè)mRNA。

用途:是檢測(cè)目標(biāo)RNA的一種高靈敏及高精度的方法。即使目標(biāo)RNA在細(xì)胞中拷貝數(shù)極少也適用。實(shí)時(shí)PCR比其他方法更靈敏、更快、更精確。最近10年內(nèi)是檢測(cè)細(xì)胞中mRNA相對(duì)豐度的主要方法。不僅可用于mRNA的檢測(cè),也可用于microRNA的檢測(cè)(參見Chen et al. 2005;Benes and Castoldi 2010)。

缺點(diǎn):市場(chǎng)上銷售的幾種商業(yè)設(shè)備采用的檢測(cè)方法不同。另外,已出版了數(shù)百種描述實(shí)時(shí)定量PCR的方案。實(shí)時(shí)PCR的每個(gè)步驟都缺乏標(biāo)準(zhǔn),導(dǎo)致可靠性和可重復(fù)性的比較即使可能,也很困難(Nolanet al. 2006;Derveaux etal. 2010)。對(duì)實(shí)時(shí)PCR提出了一些合理的建議和標(biāo)準(zhǔn),規(guī)定了實(shí)時(shí)PCR結(jié)果發(fā)表所必需的最少信息量,也許會(huì)有助于解決目前的困境(Bustinet al. 2009;Bustin 2010)。

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