怎樣用酶標儀（光度測定法）做內毒素檢測資料
一、光度測定法分為濁度法和顯色基質法。
?
?
?
?
?
?
?
?
?
光度測定法干擾試驗的制備
編號 | 內毒素濃度 | 配制內毒素的溶液 | 平行管數 |
A | 無 | 供試品溶液 | 不少于2個 |
B | 標準曲線的中點（或附近點）的濃度（設為λm） | 供試品溶液 | 不少于2個 |
C | 至少3個濃度（最低一點設定為λ） | 檢查用水 | 每一濃度不少于2個 |
D | 無 | 檢查用水 | 不少于2個 |
注 A：稀釋倍數未超過MVD的供試品溶液。
?
?
?
?
R=(CS-Ct)/λm×100%
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
注：2005年版中國藥典中指出：細菌內毒素試驗所用的器皿需經過處理，以除去可能存
在的外源性內毒素。常用的方法是在250°C干烤至少60分鐘。也可采用其他確證
不干擾細菌內毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器械，如微板孔和微量加樣器配套
的吸頭等，應選用標明無內毒素，并且對試驗無干擾的器械，試驗操作過程防止微
生物污染。
二、關于顯色基質鱟試劑試驗的一些問題
微板法（56 Test） | |
能測樣品數 (做平行管) | 需要做標準曲線：23個樣本 不需做標準曲線：28個樣本 |
每次需樣品量 | 50 ul |
優缺點 | 96個孔同時操作，同時讀數，效率與試管法相比可提高十倍以上，但該方法需要酶標儀（405nm濾光片） |
注意事項 | 為避免操作誤差，每個樣品均做2孔，再求其平均值 |
三、內毒素試驗(內毒素定量檢測)所需試劑及儀器
1．試劑（鱟試劑包括凝膠法——定性、顯色基質法——定量、動態濁度法——定量）
名字 | 用途及說明 | 規格 |
鱟試劑 | 與內毒素反應，檢測樣品中內毒素用 | 10支/盒（凝膠法）、試劑盒（光度法） |
內毒素 | 與鱟試劑反應，做陽性對照，或烘箱驗證 | 10支/盒 |
檢查水 | 溶解鱟試劑用或稀釋用 | 10支/盒（2ml、10ml）瓶（50ml） |
?
名字 | 用途及說明 | 規格 |
除熱原吸頭 | 稀釋急加樣。普通吸頭會干擾試驗，造成假陽性不能使用。 | 5支/小包 （200μl、250μl、1000μl） |
除熱原試管 未除熱原試管 | 稀釋用或反應用容器 使用前需洗干凈250度干烤1h | 6支/包 |
除熱原空安瓿 | 稀釋用或反應用容器 | 10支/盒 |
真空采血管 | 采血用? | 5ml |
除熱原加樣槽 | 加樣用 （顯色基質鱟試劑微板法用）配合8道移液器 | 3個/包 |
除熱原微板 | 加樣用（顯色基質鱟試劑微板法用） | 個 |
除熱原針筒 | 采樣用 | 支 |
3．儀器
名字 | 用途及說明 | 規格 |
旋渦混合器 | 混勻內毒素溶液 | |
移液槍 | 加樣 | 大龍（推薦）200-1000μl等各種規格 |
酶標儀 | 檢測內毒素含量 （顯色基質鱟試劑微板法用） | 北京普朗集團（DNM-9602G）型 （推薦） |
分光光度計 | 檢測內毒素含量 （顯色基質鱟試劑試管法用） | 可見光光度計 |
恒溫水浴鍋 | 保溫、加熱 |
?
名字 | 用途及說明 | 規格 |
G因子抑制劑 | 抑制G因子旁路反應 | 0.6ml/支 |
鈣鎂離子添加劑 | 陽離子調節劑 | 1ml/支 |
抗凝劑 | 血液樣品使用 | 5ml/支 |
血液稀釋劑 | 血液樣品使用 | 5ml/支 |
-
技術原理
-
焦點事件
-
焦點事件
