植物甘薯潛隱病毒（PMV）ELISA檢測試劑盒使用說明
檢測原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被植物甘薯潛隱病毒（PMV）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入陰性對照、陽性對照、樣本、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物甘薯潛隱病毒（PMV）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），判斷樣品是否含有植物甘薯潛隱病毒（PMV）。
樣品收集、處理及保存方法
血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。
嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
| 名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
| 微孔酶標板 | 96孔 | 48孔 | 無 |
| 陰性對照 | 0.3mL | 0.3mL | 無 |
| 陽性對照 | 0.3mL | 0.3mL | 無 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
| 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 無 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 無 |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
| 自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；
待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
?試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；
???????????????陰性對照孔OD值平均值≤0.15。
2. ?臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
3. ?陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性
4. ?陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性
試劑盒性能
準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗結果有效。
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
有效期：6個月
