細菌鑒定常用的生化試驗及其原理

用來鑒定細菌的生化試驗有好多種,如碳源代謝試驗、氮源代謝試驗、碳源氮源利用試驗、酶類試驗、抑菌試驗等。

1、碳源代謝試驗

碳源是為微生物提供碳素來源的物質(zhì)。用于合成菌體,碳源物質(zhì)在細胞內(nèi)經(jīng)過一系列復雜的化學變化后成為微生物自身的物質(zhì)(如糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等),碳可占一般細菌細胞干重的一半。大多數(shù)碳源還能為機體提供維持生命活動所需的能源,因此,碳源物質(zhì)通常也是能源物質(zhì)。碳源代謝試驗主要是通過檢測細菌在利用碳源時的代謝途徑及方式、利用碳源后所產(chǎn)生的特定的代謝產(chǎn)物等來鑒別細菌的生化試驗,主要是試驗各種糖類能否作為碳源被利用及其利用的途徑和產(chǎn)物。常用的碳源代謝試驗有糖(醇、苷)類發(fā)酵試驗、甲基紅試驗(Methyl Red,MR 試驗)、β-半乳糖苷酶試驗(ONPG 試驗)、乙酰甲基甲醇試驗(V.P.試驗)、葡萄糖酸氧化試驗等等。不同的微生物對各種糖類的分解能力及其所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物各不相同,如大腸桿菌能發(fā)酵乳糖、葡萄糖,產(chǎn)酸、產(chǎn)氣;傷寒桿菌只能發(fā)酵葡萄糖,產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

2、氮源代謝試驗

氮源為微生物生長提供氮源物質(zhì),如蛋白質(zhì)類、氨及銨鹽、硝酸鹽、分子氮等,主要用來合成細胞中的含氮物質(zhì)。由于不同微生物所含的酶不同,在利用氮源時會出現(xiàn)不同的代謝反應和產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物,因此,可以利用生化試驗來測定微生物對氮源物質(zhì)的利用途徑及代謝產(chǎn)物,從而對微生物進行鑒別。常用的氮源代謝試驗有硫化氫試驗、明膠液化試驗、吲哚試驗(靛基質(zhì)試驗)、氨基酸脫羧酶試驗、精氨酸雙水解酶試驗、尿素酶試驗等等。

3、碳源氮源利用試驗

碳源氮源利用試驗是細菌對單一來源的碳源和氮源利用的鑒定試驗。在無碳或無氮的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別添加特定的不同碳化物或氮化物,觀察細菌的生長狀況,就可以判斷細菌能否利用此種碳源和氮源,根據(jù)微生物對碳源和氮源物質(zhì)利用的能力和代謝產(chǎn)物的差異,對微生物的種類進行區(qū)分。常用的碳源氮源利用試驗有枸櫞酸鹽利用試驗、丙二酸鹽利用試驗、乙酸鈉利用試驗、馬尿酸鈉水解試驗等。

4、酶類試驗

酶是生物體內(nèi)細胞合成的生物催化劑,沒有酶,生物體內(nèi)的所有代謝反應都不能進行。常用的酶類試驗有氧化酶試驗、凝固酶試驗、硝酸鹽還原試驗、卵磷脂酶試驗(Nagler 試驗)、磷酸酶試驗等。

5、抑菌試

抑菌試驗是用于驗測定抗菌藥物體外抑制細菌生長效力的試驗。通過抑菌試驗,不僅可以測定一個藥物的最低抑菌濃度,同時還可以根據(jù)不同細菌的種類對不同抗菌藥的敏感性和耐藥性來對細菌進行鑒別。常見的抑菌試驗有 Optochin 敏感試驗、桿菌肽敏感試驗、新生霉素敏感試驗、氰化鉀試驗等。