真菌培養(yǎng)的詳細(xì)介紹
真菌培養(yǎng)
真菌培養(yǎng)是臨床上病原性真菌常用的非常重要的檢查方法。
適用條件：
確定臨床標(biāo)本中病原真菌的種類，提高對(duì)病原體檢出的陽(yáng)性率，保存菌種，確定病原真菌的藥物敏感性、篩選耐藥菌株；一旦發(fā)現(xiàn)肯定的致病原，譬如紅色毛癬菌或新生隱球菌時(shí)，即可確立診斷。
所用培養(yǎng)基的種類和意義：
1、基礎(chǔ)分離培養(yǎng)基：只提供病原性真菌生長(zhǎng)所需要的最基本成分譬如碳、氮、磷以及礦物質(zhì)的培養(yǎng)基。
2、沙堡弱氏培養(yǎng)基（SDA）：由Sabouraud于18世紀(jì)開(kāi)發(fā)，起初用粗制蛋白胨作氮源，以麥芽糖或蜂蜜為碳源。大多數(shù)真菌生長(zhǎng)尚可，隨后用精制蛋白胨和葡萄糖代替原有成分。Emmons改良后使其碳水化合物為2%，pH升至6.8-7.0，加入放線菌酮和氯霉素以抑制腐生型真菌（多數(shù)可能為條件致病菌）和大多數(shù)細(xì)菌（并非所有細(xì)菌）。含這兩種抗生素的SDA（pH6.8-7.0）已有商品供應(yīng)。放線菌酮也抑制新生隱球菌、一些念珠菌、煙曲霉等，應(yīng)該引起注意。含4%糖、低pH的SDA仍用于皮膚癬菌的形態(tài)學(xué)研究。
3、腦心浸膏瓊脂（BHI）：BHI也用于雙相真菌皮炎芽生菌等從菌絲相向酵母相轉(zhuǎn)變時(shí)，其中也可以加入抗生素和血液制品。
4、抑制性霉菌瓊脂（IMA）：氯霉素可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)而不抑制真菌的生長(zhǎng)，IMA用于臨床標(biāo)本最初的增菌培養(yǎng)，常用于篩選防線菌酮敏感的真菌，如隱球菌、組織胞漿菌和接合菌。
5、特殊培養(yǎng)基：包括（1）、咖啡酸瓊脂（CAA），用于辨認(rèn)新生隱球菌，因?yàn)樾律[球菌含有酚氧化酶，在CAA培養(yǎng)基中產(chǎn)生黑色素，使菌落呈黑色；此培養(yǎng)基有助于混合培養(yǎng)物中選擇性地培養(yǎng)新生隱球菌；CAA培養(yǎng)基對(duì)光敏感，應(yīng)加以避光保護(hù)。（2）、鳥食瓊脂（BA），分離痰等污染嚴(yán)重的標(biāo)本中新生隱球菌。（3）、KT培養(yǎng)基，含吐溫、蛋白、煙酸和0.3%水解酪蛋白氨基酸，用于皮炎芽生菌轉(zhuǎn)相（為酵母相）培養(yǎng)時(shí)使用。（4）、CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基，將培養(yǎng)后的單菌落在CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基劃線接種，30-37°C培養(yǎng)48小時(shí)，觀察顏色變化，根據(jù)不同顏色鑒定菌種。
真菌培養(yǎng)標(biāo)本的要求：
在Ⅱ級(jí)生物安全柜中進(jìn)行培養(yǎng)操作。血液標(biāo)本應(yīng)該注意合適的量，并多次培養(yǎng)，最好使用解離離心系統(tǒng)處理標(biāo)本；腦脊液培養(yǎng)陽(yáng)性可確診，但陽(yáng)性率低；懷疑呼吸系統(tǒng)真菌感染時(shí)，使用深咳出的痰，必要時(shí)可進(jìn)行纖維支氣管鏡防污染毛刷取痰、支氣管肺泡灌洗液、胸腔積液、活檢組織；懷疑泌尿系統(tǒng)感染時(shí)，采集清晨清潔的中段尿，最好采集自留置導(dǎo)尿管，盡快接種；皮膚、甲和毛發(fā)應(yīng)收集到折好的黑紙中，盡快接種。
培養(yǎng)條件：
建議使用室溫或30°C培養(yǎng)7天，在這種溫度下幾乎所有病原性真菌生長(zhǎng)較快較好。在某些情況下，做高溫輔助培養(yǎng)有助于鑒定，譬如煙曲霉在45°C培養(yǎng)時(shí)可用來(lái)區(qū)別其它曲霉。雙相真菌在37°C或組織中可以以酵母或小球體形式生長(zhǎng)，常用于區(qū)別其它真菌。對(duì)于組織、腦脊液等標(biāo)本，或懷疑罕見(jiàn)真菌或慢生長(zhǎng)真菌（如莢膜組織胞漿菌、隱球菌）感染時(shí)，建議至少培養(yǎng)1個(gè)月；培養(yǎng)箱應(yīng)有濕度控制。
真菌培養(yǎng)結(jié)果的意義：
無(wú)菌部位（譬如血液、腦脊液）的標(biāo)本，真菌培養(yǎng)陽(yáng)性，即可確定診斷。非無(wú)菌標(biāo)本，兩個(gè)試管有單一形態(tài)真菌生長(zhǎng)，真菌鏡檢同時(shí)陽(yáng)性者提示有臨床意義；應(yīng)當(dāng)結(jié)合真菌生長(zhǎng)部位、是否連續(xù)培養(yǎng)陽(yáng)性、真菌鏡檢提示、組織病理學(xué)結(jié)果、最高生長(zhǎng)溫度及患者的臨床信息，以區(qū)分致病菌和污染菌
