PCR后測序結(jié)果怎樣分析
首先,看測序峰圖,如果結(jié)果的彩圖顯示峰型是尖銳單一的,堿基所對應(yīng)的編碼是一致的,那么可以判斷序列是可以使用的.如果出現(xiàn)雙峰,信號中斷等異常現(xiàn)象,那么需要重新制備或者克隆后再測序.
其次,將PCR產(chǎn)物在NCBI上blast,看是否與你預(yù)期想要的片段符合,如果是匹配度一致,那么可以進行下一步,例如克隆,表達等.如果是匹配度不高,那么建議重新制備,最好是采用touchdown或巢式PCR等方法,提高產(chǎn)物的特異性后再擴增測序.
另外,如果是做SNP分析的,那么需要你通過看測序彩圖,找出相應(yīng)的突變雜合位點.
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