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pcr電泳圖詳細分析方法,你get了么?

2019.12.17

  做PCR擴增,電泳圖應該怎么分析?

  在分析電泳圖前,你要知道PCR擴增是為了得到目的帶,擴大濃度進行后續試驗D;而NA擴增前后的位置取決于你擴增的目的片段的長度以及PCR體系是否合理!

  那么電泳圖怎么分析?

  通過凝膠成像系統拍攝圖片,注意調整對比度。如果是寫報告的話,可以標記出marker各條帶的分子量以及亮度,詳見說明書;

  然后說明擴增片段與目的片段大小相同,均為xx;如果圖像上有雜帶可以分析一下,比如可能是引物二聚體之類的情況,以便下次實驗可以酌量調整退火溫度或者各成分的用量。

202148_201912171544531.jpg

  擴展資料:

  電源電壓

  在低電壓時,線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。但是隨著電場強度的增加,不同分子量的DNA片段的遷移率將以不同的幅度增長。

  片段越大,因場強升高引起的遷移率升高幅度也越大,因此電壓增加,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。要使大于2kb的DNA片段有效分離所加電壓不得超過5V/cm。

  嵌入染料的存在

  熒光染料溴化乙啶用于檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的堿基對之間并拉長線狀和帶缺口的環狀DNA,使其剛性更強,還會使線狀DNA遷移率降低15%。

  離子強度影響

  電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配制凝膠),電導率最小,DNA幾乎不移動,在高離子強度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導很高并明顯產熱,嚴重時會引起凝膠熔化或DNA變性。



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