數字PCR的優勢
? ? 數字PCR是生命科學領域最引人矚目的創新之一。與其他傳統分子診斷技術相比,數字PCR技術的優勢在于:
? ? 高靈敏度,可實現單分子級檢測dPCR本質上將一個傳統的PCR反應變成了數萬個PCR反應, 在這數萬個反應單元中分別獨立檢測目的序列,從而大大提高了檢測的靈敏度。
? ? 高精度,可檢測微小差異
? ? 在大量野生型基因存在的情況下精準地檢測低含量的突變基因是目前的研究難點之一,競爭性反應嚴重影響突變基因的檢測。dPCR技術從背景序列中檢測低豐度目的序列的能力和高靈敏度的特點使得這一技術特別適合在復雜背景中檢測稀有突變。
? ? 絕對定量,不依賴標準品和參考曲線
? ? 數字PCR直接計算目的序列的拷貝數,無需依賴于Ct值和標準曲線就可以進行精確的絕對定量檢測。
? ? 高重復性,消除擴增效率偏差影響
? ? FAM、HEX和Cy5通道濃度平均值和CV值的數據表明, 在所述的實驗條件下,三種測試濃度之間沒有統計學差 異(p<0.05)。
? ? 強耐受抑制物,適用于多種復雜樣本
? ? 血液、糞便、食品、土壤等樣本中含有大量PCR反應的抑制物,極大地影響 了PCR反應效率。另外,在某些檢測中,難以制備測定標準曲線所需的標準物質。dPCR不受PCR抑制物的影響、不依賴標準曲線的優勢,使其特別適合于這些復雜樣本中基因表達的準確定量檢測。
推薦