多重PCR基本原理與常規(guī)PCR相同,區(qū)別是在同一個反應(yīng)體系中加入一對以上的引物,如果存在與各對引物互補(bǔ)的模板,則它們分別結(jié)合在模板相對應(yīng)的部位,同時在同一反應(yīng)體系中擴(kuò)增出一條以上的目的DNA片段。多重PCR反應(yīng)體系的組成和PCR循環(huán)的條件需要經(jīng)過優(yōu)化以確保同時擴(kuò)增幾個片段。

理論上只要PCR擴(kuò)增的條件合適,引物對的數(shù)量可以不限,但由于各種條件的限制,實(shí)際能夠擴(kuò)增的引物對數(shù)量是有限的。?

PCR結(jié)果的分析方法有以下幾種,包括:瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、核酸雜限制性酶切分析、核酸測序等,其中瓊脂糖凝膠電泳是最簡單、最快速的方法,但是與聚丙烯酰胺凝膠電泳相比分辨率比較低。限制性酶切分析需要將PCR產(chǎn)物回收酶切后再次電泳,耗時費(fèi)力,難以推廣應(yīng)用。

核酸測序是鑒定PCR產(chǎn)物最可靠的方法,但需要專門的測序儀器,并且需要花費(fèi)的時間也比較長。如果要將鑒定感染性疾病病原的多重PR方法用于臨床及現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查,瓊脂糖凝膠電泳是最佳的選擇