茚三酮反應的反應機制
除脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應生成黃色物質外,所有的α-氨基酸及一切蛋白質都能和茚三酮反應生成藍紫色物質。
該反應分兩步進行,首先是氨基酸被氧化,產生 CO2 、NH3和醛,而水合茚三酮被還原成還原型茚三酮;第二步是所生成之還原型茚三酮與另一個水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質。此反應的適宜pH為5~7,同一濃度的蛋白質或氨基酸在不同pH條件下的顏色深淺不同,酸度過大時甚至不顯色。
該反應十分靈敏,1:1 500 000濃度的氨基酸水溶液即能顯示反應,因此是一種常用的氨基酸定量方法。但也有些物質對茚三酮也呈類似的陽性反應,如β-丙氨酸、氨和許多一級胺化合物等。所以定性或定量測定中,應嚴防干擾物存在。
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