T/NAASS 059-2023
牛呼吸道合胞體病毒病競爭性酶聯免疫 吸附試驗抗體檢測技術規程

Technical specification for detection of competitive ELISA antibodies against bovine respiratory syncytial virus

標準號

T/NAASS 059-2023

發布

2023年

發布單位

中國團體標準

當前最新

T/NAASS 059-2023

 

 

適用范圍

3　術語和定義 下列術語和定義適用于本文件。 牛呼吸道合胞體病毒 Bovine respiratory syncytial virus, BRSV 牛呼吸道合胞體病毒是單股負鏈RNA病毒，屬副粘病毒科、肺病毒屬。感染奶牛和肉牛后可引起急性呼吸道疾病綜合征。 3.2   競爭性酶聯免疫吸附試驗 Competitive enzyme linked immunosorbent assay, cELISA 競爭性ELISA法是將已知的特異性抗原包被在固相載體上，加入待測樣本和酶結合物，其中的相應抗體即可與載體上的抗原和酶結合物競爭結合，洗去未結合的材料和被競爭結合的酶結合物，加入酶的底物，由呈色反應來測定抗體。 4　競爭性酶聯免疫吸附試驗 試驗準備 實驗環境、儀器與設備、洗液的制備、稀釋液的制備、示蹤劑工作液的配制按照試劑盒說明書規定執行。稀釋用蒸餾水應符合GB/T 6682的要求。 檢測樣品 無菌采集牛靜脈血2 mL～3 mL,自然凝固1 h～2 h，1500rpm/min~2000rpm/min離心5 min，收集血清于1.5 mL離心管中。 操作程序 使用前將所有試劑（結合物除外）恢復至室溫（20 ℃～25 ℃），輕輕搖動或旋轉，使試劑混合均勻。 4.3.1　取板 取出微孔板，并在操作記錄表上標記樣品的位置。如果使用微孔板的一部分，則只需取出足夠檢測樣品的條數。未使用的微孔板條用錫箔紙包好，保持干燥與密封，2 ℃～8 ℃保存。 4.3.2　加樣 按照試劑盒說明書規定濃度，稀釋血清樣品，每孔加入待檢樣品，按照板孔布局加陰性和陽性對照。 4.3.3　稀釋酶結合物 用稀釋液將酶結合物稀釋至所需要的量。 4.3.4　加酶結合物 每孔加入酶結合物，搖勻。 4.3.5　感作 將微孔板密封后，37 oC孵育。 4.3.6　洗板 棄去微孔板中液體，用300 μL左右的洗滌液洗滌每個板孔6次。在每一次洗滌后，甩去每個板孔中的液體，在洗滌時以及在加入下一步試劑之前要防止反應板出現干燥現象，避免孔內產生氣泡，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液體. 4.3.7　加底物 每孔加入底物溶液。避光室溫孵育。 4.3.8　加終止液 每孔加入終止液終止反應。 4.3.9　測定吸光值（OD值） 酶標儀預熱15 min，在加入終止液5 min內讀取波長的吸光度值。 實驗有效性檢測 只有當滿足試劑盒說明書規定的條件時檢測才有效。 結果計算 使用試劑盒說明書指定的計算公式進行結果計算。 結果判定 使用試劑盒說明書規定的判定標準進行結果判定。

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