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數(shù)字PCR的原理

2022.2.28

數(shù)字 PCR 的工作原理在于將 DNA 或 cDNA 樣品分割為許多單獨(dú)、平行的 PCR 反應(yīng),部分這些反應(yīng)包含了靶標(biāo)分子(陽性),而其他不包含(陰性)。 單個(gè)分子可以被擴(kuò)增一百萬倍或更多。 在擴(kuò)增期間,TaqMan? 化學(xué)試劑及染料標(biāo)記探針可用于檢測特定序列的靶標(biāo)。 當(dāng)不存在任何靶標(biāo)序列時(shí),沒有信號累積。 PCR?分析后,陰性反應(yīng)片段用于生成樣品中靶標(biāo)分子的絕對計(jì)數(shù),而無需標(biāo)準(zhǔn)品或內(nèi)標(biāo)。

  • 數(shù)字PCR即Digital PCR(dPCR),它是是一種核酸分子絕對定量技術(shù)。相較于qPCR,數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù),是對起始樣品的絕對定量。

  • PCR實(shí)際上是一個(gè)在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下,DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng),擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結(jié)合。

  • 病原體檢測

精確地對靶 DNA 或 RNA 分子中的細(xì)微變化進(jìn)行定量分析,從而檢測和監(jiān)測病原體。

  • 與新一代測序 無縫對接

無需使用標(biāo)準(zhǔn)曲線,直接對 NGS 庫執(zhí)行絕對定量分析。

  • 基因表達(dá)分析

可對少量 mRNA 和 miRNA 的細(xì)微變化進(jìn)行準(zhǔn)確及重復(fù)性極佳的檢測。

  • 環(huán)境監(jiān)測

使用 QX200 系統(tǒng)可測試多種環(huán)境樣品,例如土壤和水。

  • 食品檢測

采用經(jīng)過驗(yàn)證的 ddPCR 方法對轉(zhuǎn)基因生物體 (GMO) 進(jìn)行評估。


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