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兩種多重數(shù)字PCR試劑檢測EGFR的活化和耐藥位點

2020.4.13

數(shù)字PCR應(yīng)用文獻(xiàn)---

兩種多重數(shù)字PCR試劑檢測EGFR的活化和耐藥位點


NaicaTMcrystal數(shù)字PCR

通常生物學(xué)樣本量有限，通過單次實驗獲得足夠多的信息對于研究人員和診斷人員至關(guān)重要。NaicaTMcrystal數(shù)字PCR系統(tǒng)實現(xiàn)了單次實驗中同時檢測和定量多重生物標(biāo)志物，并確保數(shù)據(jù)精準(zhǔn)度和可信度，通過3個不同的熒光通道，非常明確地區(qū)分靶標(biāo)位點。這種簡單快速的技術(shù)平臺能夠兼容多種熒光染料組合，大大地擴(kuò)展了實驗設(shè)計的可能性。

在NSCLC（非小細(xì)胞肺癌）治療中，EGFR（表皮生長因子受體）是種常見的藥物作用靶點。EGFR活化突變位點，如L858R，L861Q和19外顯子缺失用于預(yù)測TKIs(酪氨酸激酶抑制劑)藥物藥效，同時EGFR T790M突變用于一代TKIs藥物耐藥預(yù)測。
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為了在不犧牲結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性的情況下，在單個測試中檢測這些突變的數(shù)量，開發(fā)了兩個多重方法。引物和探針使用NaicaTMcrystal數(shù)字PCR系統(tǒng)三種不同熒光通道，在Panel1中可同時檢測EGFR L858R、L861Q、T790M和野生型EGFR，在Panel2中可以同時檢測19外顯子缺失、T790M和野生型EGFR。所有的assays都在400copise/ul野生型DNA 背景下，EGFR突變等位基因的頻率分別為0.25%和0.1%（如圖）


這兩個3色數(shù)字PCR檢測EGFR試劑盒檢測非小細(xì)胞肺癌患者跟NGS比較，測得的突變等位基因EGFR片段具有較強的相關(guān)性。（如圖）


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